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本试剂盒是基于一种新型荧光探针CFDA SE的用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。CFDA SE目前被广泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine掺入等其它细胞增殖检测方法。

基于CFDA SE荧光标记的细胞增殖检测和[3H]-thymidine掺入、BrdU标记获得的检测结果完全一致，但同时可以提供更多的细胞增殖信息。使用CFDA SE检测可以提供整个细胞群中有多少比例的细胞分裂了1次、2次或更多次数，同时如果和其它荧光探针联用，可以获取不同分裂次数细胞的其它相关信息。

CFDA SE的全称为Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester，分子式为C29H19NO11，分子量为557.47。CFDA SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地(spontaneously)并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。被CFDA SE标记的非分裂细胞的荧光非常稳定，稳定标记的时间可达数个月。CFSE标记细胞的荧光非常均一，比以前使用的其它细胞示踪荧光探针例如PKH26的荧光更加均一，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均匀。

由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。

CFDA SE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测，也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测，甚至还可以用于细菌增殖的检测。

1. CFDA SE配制成储存液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFDA SE易被水解，在水溶液中会很快变质。请在使用过程中避免接触水。在标记细胞的过程中和水接触是在许可的范围内的。
   
2. CFDA SE溶剂在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
   
3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
   
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 检测前的准备：
   
   1. CFDA SE储存液配制：用试剂盒中所带的共1mL CFDA SE溶剂，取0.9mL加入至CFDA SE储液管中，即可配制成CFDA SE储存液。配制完成后分装到试剂盒所提供的原来装CFDA SE溶剂的管子中，并做好标记。
      配制好的CFDA SE储存液均为2000×，-20℃避光保存，最好能-70℃避光保存。-20℃避光保存宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。-70℃避光保存可以适当延长使用时间。
      
   2. CFDA SE细胞标记液的配制：准备适量无菌的细胞培养级纯水，根据实验需要配制适量的CFDA SE细胞标记液。例如，取20mL CFDA SE细胞标记液(10×)，加入180mL细胞培养级纯水，混匀后即为CFDA SE细胞标记液。配制好的CFDA SE细胞标记液可以4℃保存，长时间不用可以-20℃保存。
2. 标记和检测：
   
   1. 用1mL CFDA SE细胞标记液悬浮100万至500万细胞，置于15mL离心管内。
      
   2. 用CFDA SE细胞标记液稀释CFDA SE储存液(2000×)至2×。例如取1微升CFDA SE储存液(2000×)至1mL CFDA SE细胞标记液中，混匀后即为CFDA SE储存液(2×)。
      
   3. 把1mL CFDA SE储存液(2×)加入到步骤2.a中含有1mL待标记细胞的15mL离心管内，轻轻混匀。
      
   4. 37℃培养箱中，避光孵育15～30分钟。
      
   5. 离心后去上清，加入2mL PBS(不含钙镁离子)溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。
      
   6. 加入合适的培养基制成细胞悬液。
      
   7. 取500μL的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量进行实验。
      注意：标记的细胞呈绿色荧光，检测时的激发波长可以选择488nm，此时的发射波长为518nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。